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SUMO-BMP7融合蛋白的表达及纯化
作者:于杰淼  曹鹏  卢悟广  蔡雪婷  张娟  王旻   
单位:中国药科大学生命科学与技术学院 江苏省中医药研究院细胞与分子生物学实验室  
关键词:小泛素样修饰蛋白 骨形态发生蛋白 克隆 融合表达 纯化 融合蛋白 表达量 双酶切 大肠杆菌 可溶性表达 
分类号:
出版年,卷(期):页码:2009,16(3):1-1
摘要:

采用融合表达技术,将BMP-7与SUMO(Small ubiquitin-related modifier)基因通过PCR技术连接起来,组成SUMO-BMP7基因片段,双酶切后插入到pET28a载体中克隆,挑取单克隆进行酶切及菌落PCR检测,提取检测结果为阳性的质粒,转化进大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SUMO属于小泛素样修饰因子,具有帮助蛋白质折叠的作用,可提高目的蛋白的表达量和增加目的蛋白的可溶性,经特异性酶切后,目的蛋白能够得到天然的N末端;结果:表达后经超声、Ni-NTA纯化得到SUMO-BMP7融合蛋白。确定了可溶性SUMO-BMP7适宜的诱导温度、诱导时间和IPTG浓度,得到了电泳纯度大约98%的SUMO-BMP7融合蛋白;获得的可溶性融合蛋白,具有很高的表达量。分离纯化后,SDS-PAGE纯度可达到98%左右。为其下一步的酶切和活性研究提供基础。

基金项目:
江苏省国际合作项目(BZ2007078) 江苏省自然科学基金项目(BK2008487)
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