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非融合型重组人骨唾液蛋白在毕赤酵母中的高效表达及纯化
作者:王江涛 王捷 廖新梅 张宏斌 WANG Jiang-tao WANG Jie LIAO Xin-mei ZHANG Hong-bin    
单位:广州军区广州总医院医学实验科 广东 广州 510010 
关键词:毕赤酵母   优化   非融合型重组人骨唾液蛋白   免疫亲和层析   纯化   活性 
分类号:Q81
出版年,卷(期):页码:2008,15(1):1-3
摘要:

通过正交设计对毕赤酵母GS115/pPICZaAN-hbsp工程菌的发酵条件(菌体密度、甲醇诱导浓度、初始pH值、诱导时间)进行优化.采用重组人骨唾液蛋白(recombinant lauman bone sialoprotein,rhBSP)单克隆抗体与Aldehyde-Resin HP FF介质偶联制备免疫亲和层析柱,纯化非融合型rhBSP,并用Western blotting和补体抑制实验检测非融合型rhBSP的抗原性和活性.毕赤酵母GS115/pPICZαAN-hbsp工程菌最佳发酵优化为:菌体密度OD600达到45甲醇诱导剂量为1.5%,pH值6.0,诱导时间2 d,最大表达量为0.126 mg/ml.经免疫亲和层析法纯化后,SDS-PAGE显示非融合型rhBSP为43~66 ku的分散条带,纯度在90%以上,Westernblotting显示rhBSP具有良好的抗原性,补体实验证明纯化的非融合型rhBSP活性很好.毕赤酵母GS115/pPICzαAN-hbsp工程菌发酵条件经优化后能高效表达非融合型rhBSP,应用免疫亲和层析方法纯化的非融合型rHBSP纯度好,活性高,为进一步研究非融合型rHBSP打下了基础.

基金项目:
广东省自然科学基金
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